Применение хроматографических методов анализа для выявления фальсификатов среди препаратов различных фармакологических групп

Проба может также наноситься непосредственно на сухую поверхность материала колонки или, если плотность пробы превышает плотность элюента, наслаиваться на поверхность материала колонки под элюент. Другой конец колонки присоединяют к соответствующему детектора с устройством, регистрирующим и обеспечивает контроль относительных концентраций распределяемых компонентов пробы. В качестве наполнителя может использоваться либо мягкий материал (набухли гель), или жесткий (пористое стекло, силикагель), или поперечнозшитий органический полимер, который подходит для этого растворителя. При использовании жестких материалов применяют подачи подвижной фазы под давлением, ускоряет распределение. Подвижную фазу выбирают с учетом природы пробы, наполнителя и метода детектирования. Обычно используют такие детекторы: фотометрический, рефрактометрический или люминесцентный. Если необходимо, может быть присоединен автоматический коллектор фракций. Основное применение в фармацевтическом анализе - анализ полимеров (например. Декстранов).Флюидная (сверхкритическая) Х. - метод хроматографического разделения, в котором подвижная фаза является флюидом (газом в сверхкритическом или субкритических состоянии). Неподвижная фаза, помещена в колонку, хорошо разделенными твердыми частицами (силикагель или пористый графит), химически модифицированной неподвижной фазой (используется в жидкостной Х.) или поперечно связанной жидкой пленкой, равномерно нанесенной на стенки колонки для капиллярных колонок. Флюидная Х. основывается на механизмах адсорбции или массового распределения. Оборудование состоит из насосной системы, охлаждается, инжектора, хроматографической колонки, помещенной в термостат, детектора, регулятора давления и устройства для обработки данных (интегратор или самописец). Подвижную фазу составляет оксид углерода, который может содержать полярные модификаторы (метанол, 2-пропанол и ацетонитрил). Состав, давление (плотность), температура и скорость ее потока могут быть постоянными или изменяться в соответствии с заданной программой. Обычно используют спектрофотометрический или пламенно-ионизационный детекторы. Могут также использовать другие специальные детекторы. Флюидная Х. сочетает в себе преимущества жидкостной Х. (высокая растворяющая способность) и газовой Х. (высокая эффективность и универсальное детектирования). Ее применяют для труднолетучих и термолабильных соединений, особенно природного происхождения.Основные величины и соотношения в хроматографическом анализеСвязь объема (VR) и времени (tR) содержание:VR = tR · v,Размер Rf (планарные варианты - ТСХ, ХП):где a - расстояние середины пятна после хроматографирования от точки нанесения пятна («старта»); b - расстояние фронта подвижной фазы от «старта». Для «хвостатых» пятен середина пятна является неопределенной, для них (с целью идентификации) величину а иногда измеряют от верхнего края после хроматографирования. Связь колонковой Х. (напр. ВЭЖХ) с планарными вариантами (ТСХ):где tM (часто обозначается также как t0) - мертвое время колонки (соответствует компоненту, не содержится). Вместо времени содержания нередко используют объем содержания. Это уравнение приблизительное, поскольку ВЭЖХ в отличие от ТСХ, работает в режиме насыщения сорбента.Проверка пригодности хроматографической системыНа хроматографический процесс влияет много факторов, которые достаточно трудно поддаются стандартизации и существенно влияют на невидтворюванисть хроматографических методик анализа. Одним из важнейших факторов является активность сорбента. Поэтому в ГФУ выдвинуто достаточно строгие требования к стандартности сорбента и готовых ТСХ-пластинок, которые используют для анализа. Однако это не может гарантировать необходимой воспроизводимости методик контроля качества ЛП, содержащих соединения различной полярности. Кроме того, в случае колонковых вариантов (особенно при использовании сорбента с привитыми группами) следует учитывать изменение характеристик сорбента, связанную, например., С «облысением» привитых групп. Поэтому в Фармакопею США В 1990г. Введено для ВЭЖХ и газовой Х. систему тестов - «Проверка пригодности хроматографической системы». Это испытание, которое выполняют перед проведением собственно анализа и для которого обычно используют особый «раствор для проверки пригодности», стало обязательным для всех хроматографических методов и было введено другими фармакопее, в частности ГФУ. Формулировка этого испытания для планарных и колонковых вариантов отличается. Для планарных вариантов (ХТШ, ХП) по ГФУ хроматографическую систему обычно считают пригодной, если: на хроматограмме раствора сравнения, который используется для проверки пригодности хроматографической системы, четко делятся пятна указанных в отдельной ФС веществ; Rf основной пятна на хроматограмме раствора испытуемого, близкий к величине, указанной в отдельной ФС; на хроматограмме раствора сравнения, который используется для проверки чувствительности хроматографической системы, четко видно пятно. Для колонковых вариантов (ВЭЖХ, газовая Х.) хроматографическую систему обычно считают пригодной, если: относительное время удерживания указанных веществ близок к указанным значениям; количество теоретических тарелок (эффективность хроматографической системы), рассчитанная по указанным пиком, не менее указанной величины; коэффициент разделения указанных пиков, рассчитанный с хроматограмм раствора сравнения, не менее указанной величины; относительное стандартное отклонение, рассчитанное для высоты или площади указанного пика или их отношений к высоте или площади, или высоты пика внутреннего стандарта с хроматограмм раствора сравнения, не больше указанной величины; коэффициент симметрии указанного пика, рассчитанный с хроматограмм раствора сравнения, находится в указанных пределах. В последнее время две последние требования выносят в общую ФС и поэтому не включают в теста на пригодность хроматографической системы. Для обеспечения выполнения требований теста «Проверка пригодности хроматографической системы» допускают модификацию хроматографических условий, описанных в отдельной ФС.Высокоэффективная жидкостная хроматография лекарственных веществВ хроматографии вообще и в жидкостной, в частности, очень важен правильный выбор сорбента, элюента, условий хроматографирования. Для жидкостной хроматографии - это выбор такого сорбента и подвижной фазы, которые сочетались бы друг с другом. При этом подвижная фаза должна характеризоваться определенным качественным составом: величиной рН, наличием добавок кислого, щелочного и т.д. характера. Выбор необходимых компонентов подвижной фазы должен основываться на учете кислотно-основных свойств сорбатов и их полярности или гидрофобности. Так, например, анализ карбоновых кислот может быть проведен тремя вариантами. Высокополярные и гидрофильные кислоты слишком прочно удерживаются силикагелем, но не удерживаются силикагелем, модифицированным алкильными группами в обращенно-фазовом варианте. Поэтому для них предпочтителен ион-парный вариант обращенно-фазовой хроматографии. Кислоты умеренной полярности вполне поддаются разделению на силикагеле, однако для улучшения формы пиков к подвижной фазе желательно добавить около 1% уксусной кислоты. Третий вариант, пригодный для большинства кислот, кроме наиболее гидрофильных, предусматривает использование алкилсиликагеля в качестве неподвижной фазы. С целью подавления ионизации в составе подвижной фазы применяют буферные растворы с рН=2-5. Приближенная схема выбора типа хроматографических систем приведена в таблице.Варианты жидкостной хроматографии, наиболее часто применяемые для медико-биологических исследованийДля медико-биологических исследований применяются различные варианты жидкостной хроматографии. Однако для анализа белков, аминокислот, биологических макромолекул и надмолекулярных структур в основном используются аффинная, эксклюзионная и ионообменная хроматография. Все эти варианты жидкостной хроматографии различаются но способу взаимодействия молекул сорбата с компонентами нерастворимой полимерной матрицы.Аффинная хроматографияАффинная хроматография представляет собой один из наиболее специфических методов выделения реакционноспособных соединений, в частности, ферментов, и даже таких надмолекулярных агрегатов, как вирусы. Разделение биологически активных веществ в этом варианте хроматографии основано на их специфическом взаимодействии с лигандами, ковалентно связанными с нерастворимым носителем (матрицей). Сорбентом в этом случае служит гель типа агарозы, к которому ковалентно присоединен подходящий лиганд, например субстрат фермента. Когда раствор, содержащий выделяемое вещество (скажем, фермент), пропускают через колонку с соответствующим образом приготовленным сорбентом, взаимодействие этого вещества с закрепленным на сорбенте лигандом (в данном случае фермента с его субстратом) приводит к его удерживанию и, следовательно, к концентрированию. Поскольку сорбция носит обратный характер, это вещество можно затем элюировать с колонки. Разделение по методу аффинной хроматографии может быть основано на различного рода специфических взаимодействиях, таких как связывание фермента с ингибитором, гормона с рецептором, антигена с антителом, а также гибридизация нолинуклеотидов. Этот метод позволяет выделять даже целые клетки.ЗаключениеПрименение хроматографии наряду с другими физико-химическими методами, а также их взаимное сочетание, является тенденцией в разработке методик исследования качества потребительских товаров.Фальсификация лекарственных препаратов — проблема, угрожающая любому государству. Трудно обнаружить подделки, отследить путь их проникновения на рынок, трудно с ними бороться. Правительства государств должны отдавать себе отчет в том, что когда опасность становится видимой, многим пациентам вред уже причинен. Распространение Интернета, совершенствование технологических возможностей преступников, ложное чувство безопасности у жителей развитых стран — все это способствует распространению фальсифицированных лекарственных препаратов в мире.Для решения проблемы фальсификаций на международном уровне необходимо в первую очередь создать базу данных подделок, которая станет основным источником информации для фармацевтических компаний, и обязать все фармацевтические компании предоставлять информацию об обнаружении подделок органам правопорядка (в связи с чем необходимо заранее позаботиться о защите репутации компаний).Одной из самых эффективных стратегий предотвращения фальсификаций лекарственных препаратов является тщательное документирование пути доставки препаратов потребителю.Кроме всего вышеизложенного, необходимо организовать исследования по эффективности мер борьбы с фальсификацией лекарственных препаратов, что позволит в дальнейшем совершенствовать систему защиты фармацевтического рынка от проникновения подделок.Список литературы"Фармацевтический вестник" №33 (184) 12 сентября 2000 г.Бюллетень Союза "За химическую Безопасность", «Химия и жизнь», 6 апреля 2001 г.Семен Хацкин, Глеб Щелкунов, "Ремедиум" №3, 2000А.Мельников, "Известия", 31 марта 2001 г.,Анастасия Нарышкина, «Время новостей» №117, 5 июля 2001 г.Елена Ионова, «Комсомольская правда», №53, 28 марта 2001г.Ирина Степанова, «Медицинская Газета», 28.03.2001Николашкин А.Н. (каф. Технологии лекарств, РГМУ им. акад. И.П. Павлова), "Фальсификация лекарств - как это делается и методы борьбы за здоровье людей." Журнал “ Провизор” № 9, 2005г.Журнал “Фармацевт - практик” апрель 2003г.Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ.- М.: Медицина, 2000г.Еженедельник “Аптека” № 42, 2004г.Еженедельник “Аптека” № 22, 2005г.Интернет: www. medical com.uaВестник Фармации, 2005г.Приказ № 626 от 15.12.2004г.Закон Украины « Про лікарські засоби” Журнал “Провизор” № 10, 2005г.Журнал “Провизор” № 16, 2004г.Журнал “Провизор” № 6, 2005г.Журнал “Фармаскоп” № 8, 2003г.Журнал “Фармацевт - практик” апрель, 2003г.